1、食用菌用打口机分离蘑菇孢子的方法。蘑菇孢子分离法利用了成熟子实体的有性担子孢子能自动从子实体层中弹出的特点。在无菌条件下，在合适的培养基上，孢子萌发成菌丝，是获得纯种的一种方式。孢子分离可分为单孢子分离和多孢子分离两种方法。由于纯菌丝体是从有性担子孢子中分离出来的（即细胞核经过了核络合过程），生产中常采用多孢子分离。为了保持菌株的原有特性，单孢子分离法主要用于菌株的选择和杂交育种。孢子分离主要分为两步，第一步是收集孢子，第二步是分离单个或多个孢子。
(1) 收集孢子
1、蘑菇的选择采集孢子，首先要做的是选择单独使用的蘑菇的子实体。一般栽培菇的要求是顶菇，结果早，单生，个体健壮，子实体典型。经过仔细考察和挑选，在菇床上做个记号，让菇体充分生长，直至膜即将破裂。采蘑菇时，进行孢子喷射。
2.通过射击收集孢子。蘑菇采收后，用0.1%的汞溶液浸泡一分钟左右即可杀菌。用镊子取出后，用无菌水冲洗数次，然后用无菌滤纸吸干表面水份，或直接用75%酒精棉球轻轻擦拭瓶盖和菌柄表面消毒。然后用无菌刀剪掉多余的菌柄（约1.5-2cm即可），将蘑菇直立，菌柄朝下，插入铝丝制成的支架中，放入准备好的无菌滤纸中将钟形罩放在条带顶部（如图所示）。本套孢子采集设备需提前高压灭菌灭菌。将带有子实体的孢子喷射收集器置于温度为15-20的室内，约24-48小时后，无菌滤纸上可见褐色蘑菇孢子。在无菌操作下，将采集蘑菇孢子的滤纸条放入无菌空试管中，高温真空干燥，然后放入冰箱长期保存备用。 (2) 孢子分离
1、多孢子分离法是将多个孢子接种在同一培养基上，让它们一起萌发生长，交织在一起，得到一个纯种。由于多个孢子之间的物种互补，基本可以保持亲本的稳定性，这种方法比较简单，在过去的蘑菇制种中得到广泛应用。
(1)坡度标记法：按无菌操作规程，用无菌接种环从接过孢子的滤纸条上挑取少量孢子，在PDA试管上自下而上划线倾斜培养基。不要用力，以免划伤培养基表面。接种后取出接种物烧试管口，用棉塞塞住，置于24恒温培养箱中培养。孢子萌发后（一般15-20天左右），选择萌发快、生长旺盛的菌落转移到新的试管培养基中进一步培养。
(2)包被分离法：按无菌操作方法，取一小张带孢子的滤纸，放入盛有无菌水的小三角瓶中，摇匀制成孢子悬液，然后用将试管灭菌，吸取孢子悬液，滴1-2滴于PDA试管或培养皿的培养基上，滚动试管使孢子悬液均匀分布在斜坡上，或用玻璃包衣棒涂抹将悬浮液均匀涂抹在平板上。孢子在24恒温培养基上萌发后，选出少数发育良好、生长快的菌落，转移到另一试管斜面培养基中，恒温培养为母种.
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